28 декабря 2017 г. состоялась конференция: Обсуждение плана диссертационной работы Полеевой Марины Владимировны «Совершенствование методических подходов для идентификации и оценки вирулентности штаммов Vibrio parahaemolyticus с использованием молекулярно-генетических технологий», представленного на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.02.03 – микробиология.
Научный руководитель: к.б.н., и.о. зам. директора по научно-исследовательской работе, зав. МЖК с ЦПВ Чемисова Ольга Сергеевна
Ведущий: директор института Титова Светлана Викторовна
Рецензент: к.м.н., Водопьянов Алексей Сергеевич
Секретарь: к.б.н., Щипелева Ирина Александровна
Бактерии V. parahaemolyticus являются основной причиной пищевых токсикоинфекций, связанных с употреблением в пищу морепродуктов и вызывают кишечное заболевание по типу острого гастроэнтерита, характеризующееся диареей, рвотой, спазмами в животе. В особо тяжелых случаях инфицирование может приводить к распространению заболевания и вызвать сепсис. Поэтому для практического здравоохранения важно быстро и достоверно определить как наличие возбудителя в исследуемом материале, так и его вирулентность. Основной фактор патогенности парагемолитических вибрионов – прямой термостабильный гемолизин — TDH. Традиционными и основными на сегодняшний день методами идентификации V. parahaemolyticus являются бактериологические методы. Сложность идентификации и дифференциации парагемолитических от других близкородственных видов вибрионов традиционными методами обусловлена их большим фенотипическим сходством, вариабельностью признаков и как следствие относительной диагностической ценностью отдельных таксономических тестов. В связи с этим весьма перспективен метод ПЦР с видоспецифичными праймерами, позволяющий определить в геноме бактерий участки молекулы ДНК, специфичные для каждого вида микроорганизма Целью работы явилась разработка методических подходов для идентификации и оценки вирулентности штаммов Vibrio parahaemolyticus с использованием молекулярно-генетических технологий и создание на их основе генодиагностических препаратов.
Впервые путем селекции штаммов отобран штамм V. рarahaemolyticus 14810/1 (КМ 2027) – продуцент прямого термостабильного гемолизина (TDH) парагемолитических вибрионов. Разработан способ для выделения и очистки препарата термостабильного гемолизина методом высокоаффинной хроматографии, предложены оптимальные условия для получения очищенного препарата с высокой гемолитической активностью. Методом MALDI-ToF масс-спектрометрического анализа получены новые данные о масс-спектрометрическом профиле термостабильного прямого гемолизина. Метод MALDI-ToF предложен для оценки стабильности препарата TDH. Сконструированы праймеры и зонды позволяющие проводить идентификацию штаммов V. parahaemolyticus методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real – Time PCR). Получено решение о выдаче патента на изобретение «Способ идентификации штаммов вида V. parahaemolyticus методом полимеразной-цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR)» (№ 2016146441/10(074562) от 23.11.2017 г. Получена справка об охраноспособном депонировании штамма V. parahaemolyticus 14810/1 под номером КМ 2027 как штамма-продуцента прямого термостабильного гемолизина (TDH) парагемолитических вибрионов. Направлена заявка на патент «Штамм V. parahaemolyticus, используемый в качестве продуцента прямого термостабильного гемолизина (TDH)», получена справка о приоритете № 2017141330(071647) от 27.11.2017 г. Одобрены ученым советом и утверждены директором института 27.12.2017г. методические рекомендации учрежденческого уровня «Получение и очистка препарата прямого термостабильного гемолизина (TDH) V. parahaemolyticus». Одобрены ученым советом и утверждены директором института 27.12.2017г. ТУ на набор реагентов «Тест-система для идентификации штаммов вида V. рarahaemolyticus методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR)».
